荧光标记肽结合成像技术后可用于识别特定靶点。共聚焦或荧光显微镜的体外成像仍然是研究细胞内各种生物过程和相互作用十分有效的方法之一。与蛋白质不同，这些肽定位于肌动蛋白上的特定靶点，不易聚集蛋白质，因此非常适合于体外跟踪。多肽的荧光标记包括FAM、FITC、Dansyl、TAMRA、Biotin等。科缔思生物根据需求，向客户提供具有不同类型荧光标记多肽的定制合成。



2.6.2.1 异硫氰酸荧光素（FITC）
       羧基荧光素在使用前必须要被激活，与之相比异硫氰酸荧光素（FITC）更具活性，FITC主要是与巯基或者伯氨反应，如还原型半胱氨酸的侧链，尤其是多肽或蛋白中的氨基。

       在很多应用中，荧光基团可以在化学合成的过程中引入，在选择性地去掉保护基团后，FITC可以与赖氨酸（Lysine）或鸟氨酸（Ornithine）侧链反应，或者与在合成过程中的多肽N端氨基反应。在N端标记时，在氨基和异硫氰酸盐反应形成的硫脲键之间会引入一个烷基间隔基，如氨基己酸（Ahx）。

参考文献：
Liu, J., Teng, P. Y., Kim, W. K., & Applegate, T. J. (2021). Assay considerations for fluorescein isothiocyanate-dextran (FITC-d): an indicator of intestinal permeability in broiler chickens. Poultry science, 100(7), 101202. https://doi.org/10.1016/j.psj.2021.101202
Grimm, J. B., & Lavis, L. D. (2022). Caveat fluorophore: an insiders' guide to small-molecule fluorescent labels. Nature methods, 19(2), 149–158. https://doi.org/10.1038/s41592-021-01338-6

2.6.2.2 四甲基罗丹明（TAMRA）
       另一种常见的荧光染料是四甲基罗丹明（TAMRA），在所有常见的FRET探针中，基于TAMRA的探针在细胞内分布最均匀，在细胞质中扩散最有效。 与FITC相比，TAMRA发色团具有多种优势，例如TAMRA比FITC表现出更强的抗光漂白能力。 FITC通常在494nm处激发，在520nm处发射荧光，而TAMRA的最大吸收波长和发射波长分别在546nm和580nm。 更重要的是，TAMRA有一个额外的正电荷，可能会增加TAMRA与目标化合物之间的相互作用，从而促进探针与化合物的结合。 与Cy3相似，TAMRA非常稳定且明亮，因此是一种优良的荧光基团。 而且，FITC和TAMRA标记可以组合使用，因为它们有不同的激发波长和发射波长，并且不会相互淬灭。

参考文献：
Kinosita, K., Jr, Suzuki, N., Ishiwata, S., Nishizaka, T., Itoh, H., Hakozaki, H., Marriott, G., & Miyata, H. (1993). Orientation of actin monomers in moving actin filaments. Advances in experimental medicine and biology, 332, 321–329. https://doi.org/10.1007/978-1-4615-2872-2_31
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Giakomidi, D., Bird, M. F., Guerrini, R., Calo, G., & Lambert, D. G. (2022). Fluorescent opioid receptor ligands as tools to study opioid receptor function. Journal of pharmacological and toxicological methods, 113, 107132. https://doi.org/10.1016/j.vascn.2021.107132